定點照護檢驗(point-of-care testing,簡稱 POCT,又稱即時檢驗)研究以接近採樣現場的分析為目標。要讓檢測流程更適合現場使用,除了縮小訊號讀取設備,也需要處理樣品進入檢測前的準備步驟。微流體平台可將核酸產物捕捉、光學讀取或血漿分離縮小到晶片尺度;製作聚二甲基矽氧烷(PDMS)流道晶片時,電漿處理則用於 PDMS 與玻璃的表面活化與接合,形成封閉流道。(延伸閱讀:PDMS 微流道晶片製程)
核酸感測:將擴增產物的捕捉與螢光讀取整合到晶片
對需先擴增目標序列的核酸檢測而言,完成擴增後,還需要讀取產物的訊號。若螢光讀取仍仰賴昂貴、不易搬移且需受訓人員操作的設備,檢測流程就難以移至現場。要讓這段流程更適合現場使用,訊號讀取本身也需要小型化。
葡萄牙 INESC MN 與瑞典 SciLifeLab 的 Ruben R. G. Soares 等跨國團隊,在整合光二極體的二氧化矽微珠微流體核酸感測研究中,將已完成滾環擴增(rolling circle amplification, RCA)的核酸產物送入二氧化矽(silica)微珠捕捉區。裝置利用尺寸選擇性捕捉富集產物,再由整合於晶片的薄膜光二極體讀取螢光訊號,將產物捕捉與訊號讀取結合在同一微流體裝置中。
製作晶片時,PDMS 流道層與玻璃基板經氧氣電漿清潔與表面活化,再貼合形成封閉流道,讓樣品溶液流經微珠捕捉區。
研究使用來自感染細胞培養分離株的 RNA。在流感 A 型病毒的實驗中,RNA 先經反轉錄與兩輪滾環擴增,再將擴增產物送入晶片捕捉與讀取;研究也以伊波拉病毒 RNA 示範此讀取方式。整合式光學讀取讓核酸分析朝可攜式裝置發展,更貼近現場檢測的需求。
血漿分離:在分離效率與處理流量之間改善流道設計
以血漿為樣品的生物標誌檢測,需先分開全血中的血球與血漿。傳統上常以離心處理;這類微流體分離研究則著重改善離心流程對血液量、處理時間與專門實驗室條件的需求,以少量樣品與可攜式裝置為發展方向,讓血漿前處理更接近 POC 的使用需求。
這類微流體分離設計也面臨流速與分離品質的取捨:高流速下紅血球容易進入血漿收集通道,降低分離效率,並可能造成紅血球破裂(溶血);若降低流速,又會減少單位時間可處理的血液量。因此,流道設計需要兼顧血球與血漿的有效分離,以及足夠的處理通量。
美國德州農工大學的 Han Zhang、Arum Han 等人與跨機構團隊,在圓形漸變寬度交叉流道血漿分離研究中,設計兩條由交叉流道相連的圓形通道,圓形通道與交叉流道皆採用漸變寬度。全血沿血球通道流動,血漿經交叉流道進入收集通道;漸變寬度結構用來降低血球進入血漿通道的情形,同時維持較高的連續處理流量。圓形配置也縮小了裝置所占面積。
製作晶片時,圖案化 PDMS 層經電漿處理後與玻璃接合,形成封閉的血球、血漿與交叉流道。研究使用未稀釋的人類全血,在 2,000 µL/h 的流速下,紅血球分離效率為 97%,血漿萃取比為 22%。這類晶片有望簡化檢測前的血漿分離,為後續生物標誌分析提供樣品。
資料來源與延伸閱讀
- Soares RRG, Neumann F, Caneira CRF, Madaboosi N, Ciftci S, Hernández-Neuta I, Pinto IF, Santos DR, Chu V, Russom A, Conde JP, Nilsson M. Silica bead-based microfluidic device with integrated photodiodes for the rapid capture and detection of rolling circle amplification products in the femtomolar range. Biosensors and Bioelectronics. 2019;128:68–75. 葡萄牙 INESC MN、里斯本大學 Instituto Superior Técnico,以及瑞典斯德哥爾摩大學與皇家理工學院(SciLifeLab)團隊。DOI;PubMed 摘要;ScienceDirect 論文頁面。
- Zhang H, Anoop K, Huang C, Sadr R, Gupte R, Dai J, Han A. A circular gradient-width crossflow microfluidic platform for high-efficiency blood plasma separation. Sensors and Actuators B: Chemical. 2022;354:131180. 德州農工大學跨機構團隊。DOI;作者公開摘要。
- Harrick Plasma 技術與應用資料:Microfluidics;A Brief Guide to Microfluidic Device Applications in the Life Sciences;Nucleic Acid Biosensor;Blood Plasma Separation。